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苹果的组织培养是采用无菌培养技术
  苹果的组织培养是采用无菌培养技术,将来自优良植物的茎尖、腋芽、叶片、鳞片、块根和球茎等器官以及它们的组织切片进行离体培养,使之在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法。由于离体技术处理严格,所以很容易脱除一些细菌病原及病毒,是复壮品种的有效措施。已成功脱除的病毒和病害有苹果褪绿叶斑病毒、花叶病病毒、轮纹病等。苹果矮化砧、抗寒砧的组织培养也已成功。苹果脱毒组培技术流程具体如下。
  
  一、外植体材料选择与处理
  
  早春,将上年芽接或切接的盆栽长富2号苹果苗移人温室,待新梢长出3~5片新叶时,放入热处理箱中,37℃恒温热处理30 d或32℃与37℃每8 h变换一次,变温热处理60 d。脱毒率可达80%以上。热处理结束后,从盆栽苗嫩梢上采集生长旺盛、长约2~3cm顶梢,流水冲洗10min,去掉小叶。70%乙醇浸泡30s,蒸馏水冲洗后放入0.1% HgCI中消毒10min,无菌水冲洗3~5次,解剖镜下迅速剥取1.0 mm的茎尖进行分离培养,接种于起始培养基上。
  
  二、培养基制备
  
  1.1 芽诱导
  
  适宜苹果芽诱导培养基为:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。诱导的芽生长正常可发育成新梢。
  
  1.2 继代培养
  
  选择诱导的芽丛切割成单芽茎段,转接于设计的继代培养基上。适宜的苹果继代培养基为:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖4%+琼脂0.36mg/L。培养条件:光照强度2000~2500lx,光照时间14~16 h/d,适宜温度为25℃±2.0℃。40 d后增殖6.1倍。
  
  1.3 生根培养
  
  选择生长正常的继代培养苗,剪成单芽茎段,插入生根培养基中,苹果适宜的生根培养基为:1/2MS+IAA1.5mg/L+蔗糖25%+琼脂0.36%。培养30d后,平均4~6条根/苗,长达0.5~1.0cm。根白且粗,多直接生于茎基部。
  
  三、培养条件
  
  温度26~30℃,光照强度1500~2000 LX,10 h/d。
  
  四、炼苗、移栽
  
  强光闭瓶锻炼生根苗20~25 d,不定根长至1 cm时,将培养瓶移至自然强光下,不去封口膜继续培养20 d左右,使试管苗幼茎更加充实健壮。光太强时可遮阴,控制温度在35℃以下。闭瓶锻炼后开瓶锻炼,除去封口膜,继续锻炼2~5d,使试管苗适应低湿环境。然后从瓶内取出经过锻炼生根的试管苗,洗去根部的培养基,移栽于营养钵中(基质为田园土:腐熟发黑锯末;河沙=1:2:1混合配制),于温度25℃的塑料大棚中培育。将营养钵小苗放在塑料大棚内加盖有薄膜的小拱棚内,早晚各洒水1次,1~3d保持相对湿度在85%以上,基质水分不宜过多。1周后开始逐渐揭膜通风,直至完全除去薄膜。过渡移栽约30d,地上部分生长到10cm左右时可移至大田。
 
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