1．污染原因及控制

　　

　　污染的直在培养过程中，培养基或者培养材料商滋生真菌，细菌等微生物，使培养材料不能正常生长和发育的现象，悄物组织培养中污染是经常发生的，岸．见的污染病原体是细和貞菌这两大类·细菌污常在接种0、。2人后表现．培养基表面出现液状菌斑。萌污染一般在接种3大以后才表现，《要丬是培下出现绒L状丝，然后形成不同色的孢了层．

　　

　　造污染的原因也很多，主有：培养及各种使用火菌不彻底；外体消毒不底；种时没有严格守．菌；接种和养境不清洁，如超净]．作台的过滤装置头效、培养容器的口过人：培养容器的因，包括盖了和封口膶破损等引起的污染等。

　　

　　2．污染的预防措施

　　

　　l)火荣要彻底

　　

　　在植物组织培养生产中，各种培养基以及接种过程中使用的各种器具都要严格火陌、首先是培养基的火菌．耐高温的培养基需要在121℃条件下灭菌20～30rnino．．些不耐高温的质，可采取细菌过滤器除去其中的微生物。其次，接种用的器貝．除了经过高温火菌外．在接种的过程中，每使用1次后，都要蘸酒精在酒精灯火焰上灼烧火菌：最后，对于被污染的培养瓶和器皿要单独浸泡、单独清洗，有条件的火菌后再清洗，

　　

　　2）选择适当的外植体

　　

　　要认真地选择外植体，减少外植体上的带菌量。一般多年生的木本材料比一二年生的草本材料带菌量多；老的材料比幼嫩的材料带菌多；田间生长的材料比温室生长的材料带菌多；带泥土的材料比不带泥土的材料带菌多：用茎尖作外植体时，应在室内或无菌条件下对枝条进行预培养。将枝条用水冲洗干净后插人无糖的营养液或自来水中，使其发枝“然后以这种新抽的嫩枝作为外植体，可大大减少材料的污染．或在无菌条件下对采自田间的枝条进行暗培养，从抽出的徒长黄化枝条上取材，也可明显地减少污染。

　　

　　3丿外植体消毒

　　

　　外植体上可能附着外生菌和内生菌。外生菌可以通过表面消毒方法杀火。而内生菌生长在植物材料内部，表面消毒难以杀火，培养一段时回后，病原菌自伤口处滋生。防治内生菌首先将欲取材的植株或枝条放在温室或无菌培养室内预培养，再在培养液中添加一些抗生素或消毒剂。

　　

　　4）环境消毒

　　

　　不清洁的环境也会使培养的污染率明显增加，尤其是在夏季，高温高湿条件下污染率更高：接种和培养环境要保持清洁，定期进行熏蒸或喷雾消毒，高锰酸钾和甲醛熏蒸效果好，但对人体有一定的伤害，一般每年熏蒸2～3次，平时的接种室和培养室可采用紫外线照射消毒或2／来苏尔消毒。臭氧消毒机对环境消毒效果较好，而且使用灵活方便，对人体的伤害也相对较小。

　　

　　5）严格无菌操作

　　

　　在接种时要严格无菌操作，避免人为因素造成污染。为了使超净工作台有效工作，防止操作区域本身带菌。要定期对过滤器进行清洗和更换。对内部的过滤器，不比经常更换，但每隔一定时间要检测操作区的带菌量，如果发现过滤器不能有效工作，则要整块更换。此外还需要测定操作的风速，通过调压旋钮使操作区的风速达到无菌操作的要求（20-30m/min）.