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草莓无菌组培快繁技术
草莓(Fagaria ananassa Duch)属蔷薇科草莓草莓属多年生草本植物,目前世界上栽培面积和产量在浆果类水果生产中仅次于葡萄,是一种经济价值很高的果品,除可以以鲜食外,还可加工成果酱、果酒和饮料等制品。目前在育苗繁殖中,传统的匍匐茎无性繁殖方法因其病毒感染严重、品种退化、繁殖系数低、速度慢,已不能满足目前规模化生产的实际需求。因此采用组织培养不但可以试验快繁,满足规模化生产的需求,还对一些繁殖系数较低、杂合的材料有性繁殖易分离、或从杂合的遗传群体中赛选能保持器优良遗传性的植株,具有更重要的意义。本次研究通过草莓茎尖组织培养,对草莓进行试管苗快速繁殖试验。

一、母株选择

建立无菌体系中,筛选母株是十分重要的工作,它关系到大量试管苗的质量问题。母株应选择健康且已达到生育期的植株。改善供试母环境条件也是外植体成活的一个因素,快繁用的母株必须保持在适于新梢继续萌发的条件下生长,这样才有利于外植体生长。为此,必须有一个带补充光照装置的温室,以满足草莓生长需要,并调节光质和温度,从而影响植株代谢,进而影响植物及激素产生。

二、外植体处理

草莓的组织培养以茎尖作为外植体效果比较好。可从用分株、组织培养法所繁殖的植株上取材。在接种前选择健壮无病的茎尖,采用70%无水乙醇消毒10秒,用无菌水冲洗1次,再用0.1%升汞消毒8分钟,用无菌水反复冲洗5次。这种消毒方法污染率低,成活率高,恢复生长快。

三、培养条件

切割已经灭菌的茎尖,使之长3mm,然后保持极性集中到芽诱导培养基上,经3-4周的培养后,外植体上分化出较多的嫩茎,这时可以将其切下进行继代培养。当嫩茎长出3-4枚较大的叶片后,即可以将其切下进行生根诱导。经过2-3周培养,就能形成带根系的再生植株,培养温度22-28℃每天光照8-12小时,光照强度2000-6000lux.

四、褐化问题

在草莓组织培养中,从外植体接种到成苗,褐化现象经常发生,其主要原因及解决办法有:

1.消毒:接种环境温度过高引起褐化死亡,这常在封闭式的环境内操作时发生,如在接种箱、无菌室内,应降低操作室环境温度,或缩短在高温环境中的操作时间。

2.消毒过度造成褐化死亡,这是植物外植体经常发生的现象。其中包括消毒剂选择不当、消毒剂浓度过高、消毒时间过长及消毒后冲洗不净等原因。解决办法:先做消毒剂种类、浓度、消毒时间、消毒后无菌水冲洗次数、时间等诸因素的筛选,找出最适宜的指标。

3.培养温度过高,据观察,草莓培养温度超过30℃既有褐化现象发生,超过32℃褐化增多,其中在脱分化形成愈伤组织时特别易发生高温引起的褐化。最好的解决方法就是降低培养温度。

4. 培养基不适合货培养基老化,不适宜或化的培养基一般是所含各种成分,特别是生长素和细胞分裂素偏高或偏低,或含量比例不适合草莓脱分化、再分化的要求,以致发生褐化,引起死亡。解决办法:应用适宜的培养基,培养基配好后3天内食用,培养物3-4周转移1次。

五、试管苗管理

当试管苗高约3cm并生有3-4条1cm左右长的新根时,即可进行移栽,基质可采用经过灭菌处理的腐叶、细砂按体积计以1:3的比例配成混合物。移栽前期,要将空气湿度保持在80-90%间,遮光率为50%,环境温度控制在15-20℃间。经1-2个月管理,即可定植于排水良好、疏松肥沃的砂质壤土中。草莓喜潮湿的土壤环境,不耐旱,管理期间要经常喷水。在定植对不必施用基肥,随着小苗的长大,可每隔1-2可接受过强的日光照射,应该采用先遮荫,在逐渐增加光照的管理方法。其喜温暖,怕高温,最好将环境度保持在15-25℃直剪。幼苗移栽成活率可达100%。
 
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